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改良大鼠心脏微血管内皮细胞的培养方法及鉴定

     目的 建立一种分离大鼠心脏微血管内皮细胞的方法.方法 雄性SD大鼠2只,快速取出心脏,去除左室外约1/4层,将剩余心肌组织剪碎至1 mm?大小，用0.1%Ⅱ型胶原酶在37℃水浴中消化20分钟。消化后的组织悬液经200目不锈钢筛网过滤，滤液以1000 r/min离心5分钟，弃上清后加入含20%胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞。采用差速贴壁法纯化内皮细胞，将细胞悬液接种于预先包被纤维连接蛋白的培养瓶中，37℃、5% CO?条件下培养30分钟后，转移未贴壁细胞至新的包被培养瓶继续培养。

    24小时后可见细胞呈鹅卵石样铺展，免疫荧光检测显示约90%细胞呈CD31阳性，Ⅷ因子相关抗原染色阳性率达85%。透射电镜下观察到特征性Weibel-Palade小体，证实成功分离出微血管内皮细胞。与常规方法相比，本改良法获得的细胞存活率提高至（92.3±3.7）%，且保持血管形成能力达7代以上。

    该方法通过优化组织处理步骤和纯化条件，显著提高了原代细胞的得率和纯度。后续实验证实，培养的细胞对血管内皮生长因子表现出剂量依赖性增殖反应，低密度脂蛋白摄取实验阳性，符合内皮细胞功能特征。这种稳定高效的分离培养体系，为心血管疾病机制研究和药物筛选提供了可靠的细胞模型。